蛋白纯化系统分泌型和融合型表达
发布时间:2018-01-12   点击次数:260次
蛋白纯化系统分泌型表达
外源基因表达产物在细胞质中过度积累会影响细胞的生理功能,并且后续的分离纯化较为困难,以分泌型蛋白的形式来表达外源基因产物则可以解决上述问题。分泌型蛋白是指外源基因的表达产物通过运输或分泌的方式穿过细胞的外膜进入培养基中。
以分泌型蛋白的形式表达外源基因简化了发酵后处理的纯化工艺;减少了外源蛋白在细胞内被蛋白酶降解的概率;通过对分泌表达的设计有利于形成正确的空间构象,获得有较好生物学活性或免疫原性的蛋白质。
 
蛋白纯化系统融合型表达
将外源蛋白基因与受体菌自身蛋白基因重组在一起,但不改变两个基因阅读框,这样形成的蛋白质称为融合蛋白。含原核细胞多肽的融合蛋白是避免细菌蛋白酶破坏的zui好措施。在某些情况下,融合蛋白还具有较高的水溶性和一定的生物学活性。
表达融合型蛋白时,为了得到正确的真核蛋白,在插入真核基因时,应非常注意其阅读框架,其阅读框架应与融合的I)NA片段的阅读框架一致,只有这样,在翻译时才不至于产生移码突变。
外源蛋白以融合蛋白的方式表达时易于分离纯化,可根据受体菌蛋白的结构和功能特点,利用受体菌蛋白的特异性抗体、配体或底物亲和层析等技术分离纯化融合蛋白,然后通过蛋白酶水解或化学法特异性裂解受体菌蛋白与外源蛋白之间的肽键,获得纯化的外源蛋白产物。

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